白色念珠菌谷氧还蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的 纯化白色念株菌(Candida albicans)谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)并制备多克隆抗体. 方法 从NCBI网站搜索白色念株菌Grx蛋白序列,采用利用生物信息学方法分析其生物学特性.以白色念珠菌DNA为模板,PCR扩增Grx基因,双切后与质粒pET28a相连,连接产物pET28a-Grx转入表达菌BL21 (DE3),使用IPTG诱导目的蛋白表达,使用亲和层析纯化目的蛋白.用Grx蛋白免疫小鼠,制备抗血清,进行Western blot和ELISA检测. 结果 白色念珠菌Grx蛋白含有一个CXXC结构域,属跨膜蛋白.其二级结构中58.8％的氨基酸为α-螺旋,12.6％为β片层,23.5％为无规卷曲,三级结构与酵母Grx蛋白结构相似.Grx蛋白具有多个B细胞表位.获得Grx基因并成功构建重组质粒pET28a-Grx,转染DE3后表达15.2×103的重组蛋白.用纯化的重组Grx蛋白免疫小鼠,获得的多克隆抗体ELISA效价为1∶10 240. 结论 成功表达白色念株菌Grx蛋白并制备了高滴度的多克隆抗体,为Grx的活性研究奠定了实验基础.