甲型流感病毒株H1N1(09pdm)的分离及HA和NA基因分析

目的 对成都某部人感染甲型流感病毒进行分离鉴定和基因突变分析. 方法 采集甲型流感患者咽拭子标本,通过MDCK细胞分离病毒毒株;采用免疫荧光法鉴定其感染细胞能力,采用基因分型特异性引物鉴定病毒亚型,PCR扩增血凝素基因(HA)和神经氨酸酶基因(NA)后测序,与NCBI数据库在线比对并利用MEGA软件构建系统发育进化树,分析突变位点. 结果 从甲型流感患者咽拭子标本中分离出1株流感病毒,经型特异性引物PCR鉴定为H1N1 (09pdm)亚型,该毒株在37℃时对细胞致病力较强.免疫荧光检测到分离毒株感染细胞内甲型流感病毒核蛋白(NP)高表达,甲型流感病毒NP蛋白在细胞核和细胞质中均有大量分布.利用反转录PCR和测序获得该毒株HA和NA全长基因序列.在线比对及系统发育树分析显示,该毒株HA和NA序列与2017-2018流感季其他国家流行株同源性均＞99％.对HA氨基酸突变位点进行分析,其序列的155位点存在组氨酸-酪氨酸(H-Y)点突变,该点突变也发生Influenza A/Hawaii/24/2018(H1N1) (MH245873)、Influenza A/North Carolina/19/2018(H1N1) (MH245873)和Influenza A/Missouri/51/2017(H1 N1) (MH083792)毒株上.NA氨基酸序列与近期流行的毒株均相同. 结论 本起流感病毒株H1N1(09pdm)的HA、NA基因序列与同期其他国家流行株高度相似,但在HA氨基酸序列的155位点存在一个组氨酸-酪氨酸的点突变,其意义尚不清楚.