检测基孔肯雅病毒SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法的建立及应用

目的 建立一种基孔肯雅病毒的快速诊断方法. 方法 采用基孔肯雅病毒E1基因的重组质粒作为阳性标准品.优化反应条件,建立针对基孔肯雅病毒的SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性和重复性进行评价. 结果 建立的SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的Ct值与阳性标准品在6.94×100～6.94×108 copies/μl范围内呈良好的线性关系,相关性为0.997,斜率为—3.571;其检测下限为0.694 copies/μl,且对ZIKV、DENV和JEV等均无特异性扩增;所有稀释倍数的标准品在84.0℃出现特异性熔解峰;组内和组间变异系数均小于2％.采用该方法对93份蚊虫样品进行检测,基孔肯雅病毒核酸阳性率为2.15％,普通PCR核酸阳性率为1.07％. 结论 成功建立了针对基孔肯雅病毒E1基因的SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法.该方法灵敏、特异,可用于基孔肯雅病毒感染的快速诊断.