布鲁氏菌OMP22蛋白的原核表达、纯化及其对巨噬细胞炎性反应因子mRNA表达的影响观察

目的 原核表达布氏杆菌OMP22蛋白并观察其对巨噬细胞炎性因子mRNA表达的影响. 方法 在Gen-Bank中查找牛型布鲁氏菌Omp22基因序列并进行引物设计,以其疫苗的全基因组DNA为模板PCR扩增Omp22基因,扩增产物克隆入PEASY-T3载体后测序,测序正确的基因片段与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-Omp22,转化感受态细胞BL21 (DE3)后,通过IPTG诱导表达融合蛋白OMP22.用胶回收纯化的目的蛋白作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7并检测其相关炎性因子mRNA水平. 结果 结果表明成功构建了布鲁氏菌Omp22蛋白的表达载体,转化DE3后经IPTG诱导表达约35×103的目的蛋白,与预期大小相符.Western blot检测该蛋白能被His抗体识别.用纯化的OMP22刺激小鼠巨噬细胞,其IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎性因子表达水平显著降低. 结论 OMP22蛋白能降低巨噬细胞的炎性反应表达,为布病的进一步研究提供了理论依据.