hp0169基因在幽门螺杆菌感染GES-1细胞中的作用研究

目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)hp0169基因的敲除突变株,研究其在Hp感染GES-1细胞中的作用. 方法 敲除质粒pSJHK为模板,通过同源重组双交换的方法构建hp0169基因敲除突变株(△0169),分析其与野生26695株的生长曲线及琼脂表面菌落扩散情况;通过FITC标记法检测两菌株对GES-1细胞的吸附率;以感染复数(MOI=200)构建Hp感染GES-1细胞体系,比较△0169突变株与野生株感染后致细胞凋亡及细胞活性变化的差异. 结果 通过质粒敲除、电击转化成功获得hp0169基因敲除突变株△0169.该突变株与野生菌株的生长曲线、琼脂表面菌落扩散情况基本一致,对GES-1细胞的吸附率差异无统计学意义(t值为1.102,P＞0.05).△0169突变株与野生株感染GES-1细胞活力分别为6 h(0.74±9.56)％、(0.90±6.31)％,12 h(0.53±7.89)％、(0.73±8.31)％,差异均有统计学意义(t值分别为-3.474,-2.880,P＜0.05);野生组和突变组GES-1细胞凋亡率分别为6 h(19.2±11.03)％、(20.4±8.67)％和12 h(29.3±14.47)％、(28.6±10.32)％,差异均无统计学意义(t值分别为-0.995,0.218,P＞0.05). 结论 Hp hp0169基因敲除后不影响其生长、运动以及对GES-1细胞的吸附,不影响细菌感染GES-1细胞致细胞凋亡的程度,但影响细菌感染致细胞活力下降的程度.这对研究Hp感染及致病机制有重要意义.