细粒棘球绦虫胰岛素受体蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

目的 制备细粒棘球绦虫胰岛素受体(EgIR)蛋白的多克隆抗体,为进一步研究EgIR蛋白的功能提供检测抗体.方法 利用Gamier-Robson、Chou-Fasman、DNAMAN等软件预测EgIR蛋白抗原表位,进行引物序列设计.将预测的EgIR基因部分序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli ROSETTA(DE3)株,IPTG诱导蛋白表达,表达产物EgIR蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱纯化后注射免疫家兔10 d,收集免疫血清,采用ELISA法测定抗体效价,采用Western blot检测制备的多克隆抗体与EgIR蛋白的结合特性.结果 构建的原核表达载体转化DE3后经0.8mmol/L IPTG诱导,成功表达约55 ku的EgIR重组蛋白;目的蛋白纯化后的浓度为3 mg/ml,纯度为85％;免疫家兔后收集的血清经ELISA法检测,抗体效价＞1∶51 200;Western blot检测该抗体能与10、5、1 ng/ml的EgIR重组蛋白特异结合,该抗体1∶1 000稀释后仍可检测到原头蚴、囊泡蛋白样品中的胰岛素受体蛋白.结论 成功制备兔抗EgIR亚基多克隆抗体,为EgIR蛋白的功能和药物靶标研究奠定了基础.