含内参的登革病毒与基孔肯雅病毒3重荧光定量PCR检测方法的建立与评估

目的 建立一种含内参的,针对登革病毒和基孔肯雅病毒核酸检测的3重荧光定量PCR方法. 方法 针对登革病毒3'端非结构蛋白编码区和基孔肯雅病毒5'端非结构蛋白编码区设计引物与探针,建立一套含有内参的并且能同时检测登革病毒和基孔肯雅病毒的3重实时荧光定量RT-PCR方法.对其最低检测限和特异度进行验证,通过检测血清标本对该方法进行临床应用评估. 结果 建立的3重荧光定量PCR登革病毒与基孔肯雅病毒绝对定量标准曲线显示,病毒拷贝数的对数值与CT值之间具有良好的线性关系,梯度稀释后的标准品核酸检测均呈现典型的S型曲线.检测日本脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、辛德毕斯病毒各1株,结果均为阴性,特异度为100％.用该方法检测294份登革热患者血清,灵敏度为100％,特异度为89.3％,阳性预测值为92.1％,阴性预测值为100％;测定33份基孔肯雅热病患者血清的灵敏度、特异度及阴、阳性预测值均为100％. 结论 建立的含有内参的能同时检测登革病毒与基孔肯雅病毒的3重荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度和特异度,可用于登革病毒与基孔肯雅病毒感染检测,为早期筛查和鉴别登革病毒和基孔肯雅病毒感染提供依据.