致病性大肠埃希菌EspA抗血清制备及其对细菌粘附的影响

目的 制备致病性大肠埃希菌(EPEC)分泌蛋白 A(EspA)抗血清,并检测其对EPEC粘附的中和作用. 方法 以EPEC标准株E2348/69为模板,采用PCR方法获得EspA基因,将目的基因连接载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-EspA,转入表达菌株BL21后用IPTG诱导表达并采用Ni-柱亲和层析法纯化EspA;以纯化EspA辅以佐剂免疫家兔,多次免疫获得抗血清,采用中和试验检测抗血清中和EPEC粘附Hep-2细胞的能力. 结果 成功构建Es-pA原核表达质粒,表达蛋白分子质量单位为37 ku,与预期值相符.用纯化的表达蛋白EspA免疫家兔,对流免疫电泳检测抗血清的效价为1∶2,但稀释度≤1∶16时仍能效抑制EPEC粘附Hep-2细胞. 结论 EspA抗血清具有抑制EPEC粘附Hep-2细胞作用,有望为疫苗研发的候选抗原.