细粒棘球绦虫CamKⅡ及Cavβ1基因在虫体发育过程中的表达

目的 研究钙信号通路成员EgCamKⅡ基因及EgCavβ1基因在细粒棘球绦虫各发育阶段(棘球蚴生发层、原头蚴、成虫)差异表达.方法 分别从细粒棘球绦虫的成虫、原头蚴以及棘球蚴生发层中提取总RNA,用RevertAidFirst Strand cDNA Synthesis kit反转录成cDNA,根据CamKⅡ基因序列及Cavβ1基因序列设计跨越内含子的基因特异性引物,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术,通过由质粒DNA建立的标准曲线分别对CamKⅡ基因及Cavβ1基因进行定量分析,选用的内参基因为β-actin.结果 Real time PCR显示CamKⅡ基因及Gavβi基因均在成虫阶段高表达,CamKⅡ基因在成虫中的表达量是包囊生发层的20 295倍,在原头蚴的表达量是包囊生发层的1152倍;Cavβ1在成虫的表达量是包囊生发层的5 526倍,在原头蚴的表达量是包囊生发层的636倍.两基因的相对表达量SQ/Actin分别为13.4和1.9.通过组间单因素方差分析,两基因在成虫阶段的表达与其他两个发育阶段相比具有显著的差异(P＜0.05).结论 吡喹酮的靶蛋白CamKⅡ基因及Cavβ1基因在细粒棘球绦虫各发育阶段的表达具有显著的差异,表达可能与虫体发育不同阶段特有的生物学功能有关.