细粒棘球蚴表位质粒的构建和噬菌体展示

目的 合成Eg95 T-B联合表位肽段,通过噬菌体展示技术获得含不同联合表位的肽段,为细粒棘球蚴病的多抗原表位疫苗的研制奠定基础. 方法 采用DNAman软件设计3对相应引物,分别扩增各段联合表位的核苷酸序列,连接PMD18-T载体,PCR扩增测序正确的序列,然后用T4连接酶将各段外源基因重组到M13KE噬菌体载体上,构建M13KE/Eg95-1、M13KE/Eg95-2和M13KE/Eg95-3质粒,转入大肠埃希菌ER2738感受态细胞中,运用PCR方法对插入序列进行初步鉴定,测序确定序列正确且无基因突变.使各段基因所对应的外源肽融合表达于M13KE噬菌体PⅢ蛋白上,通过PEG/NaCl沉淀法提纯重组噬菌体. 结果 成功构建了M13KE/Eg95-1 M13KE/Eg95-2与M13KE/Eg95-3噬菌体展示系统,PCR扩增Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3片段分别为192、168和222 bp,与预期大小一致. 结论 成功构建了T细胞和B细胞联合表位的噬菌体展示系统,为抗原表位的筛选奠定了基础.