旋毛虫亲肌肉抗原的基因克隆和序列分析

目的 克隆一个新的旋毛虫基因即亲肌肉抗原(myophilin)并分析其序列同源性,为旋毛虫病疫苗的研制奠定基础. 方法 检索GenBank旋毛虫基因组数据库,获得旋毛虫亲肌肉抗原的cDNA序列,利用Primer5.0软件设计引物(上、下游引物分别含NdeⅠ和Xho Ⅰ酶切位点).收集云南株旋毛虫肌幼虫,提取总RNA,并以此为模板进行RT-PCR.将PCR产物进行2％琼脂糖凝胶电泳,目的基因切胶回收后与克隆载体pMD-19T分别用Nde Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切,酶切产物以3∶1的比例与pMD-19T连接,然后转化到DH5a大肠埃希菌感受态细胞中,用Amp抗性培养基培养,阳性克隆提质粒后做PCR及双酶切鉴定,阳性菌液进行测序,测序结果与检索基因核苷酸序列通过DNAMAN软件比较,分析其同源性. 结果 RT-PCR扩增出旋毛虫亲肌肉抗原全长基因序列,大小为579 bp;亲肌肉抗原基因重组质粒经双酶切得到的片段大小分别为579、2 300和300 bp,与预期值相符;该基因序列与检索基因核苷酸序列相比,同源性为100％. 结论 成功克隆出旋毛虫亲肌肉抗原基因,为旋毛虫病疫苗的研制奠定了基础.