柯萨奇B5型病毒安徽分离株的鉴定及VP1区基因特征分析

目的 了解手足口病相关病原CVB5病毒安徽分离株VP1基因遗传进化特征. 方法 用RD和Hep-2两种细胞对采集的手足口病临床病例咽拭子标本进行病毒分离,出现CPE后培养物上清,采用微量中和试验鉴定毒株血清型;抽提病毒RNA,用RT-PCR扩增VP1基因,对扩增产物进行基因序列测定,采用ClustalX2.0和Mega5.0生物软件对测序结果与国内外参考毒株进行基因亲缘性进化分析. 结果 2株毒株微量中和试验鉴定为CVB5,基因测序显示VP1区核苷酸长度均为891 bp,其核苷酸和氨基酸序列同源性均为100％;基因进化分析显示,安徽分离株与山东、河南和浙江分离毒株亲缘性较近,处于同一进化分支Clade Ⅰ,核苷酸同源性为92.56％～98.94％,氨基酸同源性为92.93％～100％;与国外参考株及CVB5的原型株(Faulkner/)比对,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为78.89％～83.84％和96.81％～98.59％. 结论 分离到的2株病毒均为肠道病毒CVB5,其VP1区基因和氨基酸序列变异较小,与国内流行参考株同源性高.