弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

目的用pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用.方法大量制备pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照.于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFN-γ及IL-4含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况.结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05); pVAC-GRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01); pVAC-GRA4免疫组IFN-γ A值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL-4 A值各组间无明显变化(P>0.05);pVAC-GRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高; pVAC-GRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05).结论用pVAC-GRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用.