抗刚地弓形体单克隆抗体制备鉴定及初步应用
Labeled Immunoassays and Clinical Medicine（2018）
摘要
目的 制备抗弓形虫特异性单克隆抗体并初步应用.方法 弓形虫RH株体外细胞培养增殖、纯化后灭活并超声波破碎免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合.酶免法筛查阳性杂交瘤并局限性稀释法进行克隆.免疫荧光、组化及印迹对筛选后的克隆进行鉴定,最终获得的杂交瘤制备腹水并使用Protein G进行纯化.结果 2只小杂交瘤融合后初步筛查出约80株阳性克隆.剔除与其它抗原有交叉反应、抗体效价低的克隆,最终获得抗弓形虫单抗杂交瘤1株,即14H4-1.免疫荧光和免疫组化显示该株单抗与弓形虫RH具有良好的反应性,免疫印迹试验显示与弓形虫28kDa抗原条带结合.14H4-1单抗免疫球蛋白亚型为IgG1,Protein G纯化腹水后的单抗效价≥1∶12800.14H4-1单抗已应用排除2例弓形虫感染疑似诊断.结论 制备的抗弓形虫单克隆抗体性能良好,可应用于弓形虫感染病原学检测.
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