定量PCR技术快速分析噬菌体展示肽库的应用
Labeled Immunoassays and Clinical Medicine（2016）
Abstract
目的 建立无需转染菌株的快速定量方法,用以分析噬菌体展示肽库筛选.方法 选取Ph.D.-C7C噬菌体展示肽库,进行梯度稀释并提取基因组,在其载体序列上设计一对通用引物,运用SYBR Green的方法进行荧光定量PCR扩增,通过计算该方法的特异性、精密度和线性范围来确定该检测方法的可行性.结果 通过溶解曲线得知该对引物可特异性筛选噬菌体展示七肽库.通过计算每个浓度的Ct值及其偏差可发现,该体系在2×104pfu/mL～2×1010pfu/mL的浓度范围内线性关系良好,且在2×105pfu/mL～2×1010pfu/mL的浓度范围内批间不精密度小于15％.结论 建立的荧光定量PCR体系可以避免转染菌株所带来的繁琐人工劳动,并可以特异、准确、快速的对噬菌体展示肽库进行定量分析.
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Phage display,Quantitative polymerase chain reaction,Library screening
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