腮腺炎病毒核蛋白原核表达及其血清学检测方法的建立

目的 可溶性表达具有良好抗原性的腮腺炎病毒核蛋白(nuclear protein,NP),并建立特异性的腮腺炎病毒IgG抗体血清学检测方法.方法 提取腮腺炎病毒RNA,用RT-PCR法扩增NP基因全长,并连接至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-NP,鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,可溶性成分经饱和硫酸铵沉淀粗提后,再利用镍柱进行亲和层析纯化,获得高纯度的NP蛋白,并用Western blot方法进行鉴定.包被纯化后NP抗原建立间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)检测方法(NP ELISA法),并检测了348份健康儿童血清中抗腮腺炎病毒IgG抗体水平,与维润腮腺炎病毒ELISA IgG抗体检测试剂盒(维润ELISA法)进行平行比较.结果 本研究建立的NP ELISA法和维润ELISA法符合率为78.45％ (273/348);与维润ELISA法比较灵敏性为72.58％ (135/186),特异性为85.19％ (138/162).两种方法检测348份健康儿童血清腮腺炎病毒IgG抗体的阳性率分别为45.69％ (159/348)和53.45％ (186/348).结论 利用原核表达的方法成功制备出具有腮腺炎抗原特性的NP抗原,并建立了腮腺炎病毒IgG抗体ELISA检测方法,为腮腺炎病毒人群血清流行病学调查奠定了基础,但需进一步使用中和试验评估两种方法的敏感性和特异性.