Metafer4数字成像系统在荧光原位杂交计数中的应用

近年来,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术广泛应用于靶向治疗、肿瘤的诊断/鉴别诊断以及预后评估方面[1]. FISH技术通过荧光素标记的核酸探针与细胞内的靶序列杂交,其标本来源丰富,包括各种石蜡包埋组织,新鲜的血液、尿脱落细胞及羊水标本等. FISH实验包括标本预处理、变性、杂交、清洗等步骤,可人工也可上机操作.实验操作可批量进行,而阅片需在暗室中使用荧光显微镜观察并分析标本细胞内杂交信号情况[2-3].由于FISH复染剂4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)只染细胞核,高倍下难以区分肿瘤与非肿瘤区域、原位癌与浸润癌区域,且全片扫描杂交切片耗时耗力.基于以上因素,我科在原有Metafer4核型分析系统的基础上增设荧光模块( Metafer4荧光数字成像系统; MS )用于 FISH 计数. MS 由 Zeiss Imager.Z2荧光显微镜及Metafer4图像分析软件组成,可同时扫描80张切片.此系统可设置多个分类器,用于新鲜和石蜡组织的扫片、图像采集、细胞信号计数及结果统计等.为了验证MS在FISH计数中的实用性,我们选取了乳腺癌石蜡包埋组织标本50例、肺癌石蜡标本50例、尿脱落细胞标本20例、血液标本20例,进行全自动FISH染色.然后分别进行人工和MS阅片,比较人工和MS计数结果.