探讨阿糖胞苷在原代大鼠海马神经元培养中的纯化方法

目的：探讨阿糖胞苷(Ara-C)在原代大鼠海马神经元早期纯化培养中的优化方法。方法新生1d SD大鼠海马神经元原代培养48 h后，不同浓度（0、2.5、5.0、7.5、10 mmol/L）Ara-C处理0、6、12、24 h，光镜下观察细胞形态，采用MTT检测细胞活性，并通过细胞形态学分析神经元纯度，筛选出最优纯化浓度与时间；采用免疫荧光及Western blot技术检测微管相关蛋白2（MAP2）进一步检测神经元纯度，台盼蓝染色分析神经元存活率。结果大鼠原代海马神经元培养48 h，5 mmol/L Ara-C处理24 h得到的神经元纯度及活性最佳；MAP2免疫荧光染色结果显示，Ara-C处理组神经元纯度为(74.28±10.13)%，显著高于对照组(34.82±8.15)%(P=0.000)；Western Blot结果显示Ara-C处理组MAP2蛋白水平显著高于对照组(P=0.008)；台盼蓝染色显示Ara-C处理组与对照组间海马神经元存活率无差异，分别为(93.2±3.82)%和(95.6±2.37)%(P=0.109)。结论在大鼠原代海马神经元的早期培养过程中，5 mmol/L Ara-C处理24 h得到的海马神经元的纯度与活性最佳。