糖尿病患者低密度脂蛋白通过激活caspase-12途径诱导小鼠巨噬细胞凋亡

目的:研究糖尿病患者低密度脂蛋白(low density lipoprotein from diabetes mellitus patients,DM-LDL)对小鼠巨噬细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键分子caspase-12的影响,以探讨其对鼠巨噬细胞凋亡的诱导作用及机制.方法:体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,给予DM-LDL(25、50和100 mg/L)处理24 h;分别以正常人来源的低密度脂蛋白(normal low density lipoprotein,n-LDL;50 mg/L)和ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)处理24 h的巨噬细胞作为阴性和阳性对照组;另外以ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;5 mmol/L)预处理细胞1 h,然后给予DM-LDL(100 mg/L)处理24 h.分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒测定培养液中LDH的活性,Western blot法检测caspase-12蛋白的表达.结果:与TM相似,DM-LDL明显导致细胞活力下降、LDH释放和细胞凋亡率增加(P<0.05),同时显著增强caspase-12的活性,在50和100 mg/L浓度时作用更明显(P<0.01).PBA预处理可抑制DM-LDL所诱导的巨噬细胞活力下降、LDH释放和凋亡增加(P<0.05),同时抑制DM-LDL所致的caspase-12活化(P<0.05).结论:DM-LDL可导致小鼠巨噬细胞RAW264.7的凋亡,其机制可能与活化caspase-12途径有关.