细胞自噬在Aβ25-35损伤SH-SY5Y细胞中的作用

目的:探究β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的神经细胞损伤作用是否与调节细胞自噬相关,并基于Akt/mTOR通路对其作用机制进行初步探究.方法:5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L和25μmol/L的Aβ25-35与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞共同孵育24 h,MTT法检测细胞活力,Western blot检测细胞内微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白表达情况.选用合适浓度的Aβ25-35,观察自噬诱导剂雷帕霉素(Rapa)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别与Aβ25-35联用后上述指标的变化.结果:各浓度Aβ25-35均能引起SH-SY5Y细胞损伤,使细胞活力下降.Aβ25-35能够增加自噬标志蛋白LC3-Ⅱ蛋白表达,提高LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平,下调Akt和mTOR蛋白磷酸化水平(P<0.05).与自噬诱导剂Rapa联用,细胞活力未见明显变化,而细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低(P<0.05);与自噬抑制剂3-MA联用,LC3-Ⅱ蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平有下降趋势,p-Akt/Akt水平明显下降(P<0.05).结论:Aβ25-35可能通过下调Akt和mTOR蛋白磷酸化水平而诱导SH-SY5Y细胞自噬状态及损伤.