NOD8抑制人胰腺癌细胞自噬及凋亡对其自噬作用的影响

目的:探讨 NOD8(也称 NLRP10或 PYNOD)是否能抑制胰腺癌细胞发生自噬及其可能机制,并研究凋亡对 NOD8调控自噬的影响.方法:用 JetPRIME阳离子聚合物将空质粒 pEGFP-C2和重组质粒 pEGFP-NOD8分别转染入胰腺癌 Panc-1细胞,并设立空白对照组,48 h后应用 Western blot检测 NOD8蛋白、自噬相关蛋白(bec-lin-1 和 LC3-Ⅱ)以及磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白(Akt 、p-Akt,mTOR和 p-mTOR)的表达;并采用免疫荧光染色法观察细胞 LC3斑点的数量.此外,用 caspase抑制剂 Z-VAD-FMK作用于过表达 NOD8的 Panc-1 细胞后,Western blot检测 beclin-1 和 LC3-Ⅱ蛋白的表达水平;免疫荧光染色法观察细胞 LC3斑点数量.结果:pEGFP-NOD8组细胞 NOD8蛋白表达明显高于对照组和 pEGFP-C2组(P＜0.01).与对照组和 pEGFP-C2组相比,pEGFP-NOD8组细胞 beclin-1 和 LC3-Ⅱ蛋白表达及细胞 LC3斑点数量显著降低;并且 pEGFP-NOD8组细胞 p-Akt及 p-mTOR蛋白表达量显著上升(P ＜0.01),而AKT和 mTOR蛋白表达无明显差异.与 pEGFP-NOD8组相比,pEGFP-NOD8+Z-VAD-FMK组细胞 beclin-1 和 LC3-Ⅱ蛋白表达水平及 LC3斑点数量显著高于 pEGFP-NOD8组.结论:NOD8可抑制 Panc-1细胞自噬,其机制可能与激活 PI3K/Akt/mTOR通路有关;凋亡可增强 NOD8对自噬的抑制作用.