胰腺癌高表达抗原MUC4 CTL表位肽的筛选与改造

目的:观察胰腺癌高表达抗原黏蛋白4(MUC4)的改造表位是否有HLA-A2限制性抗肿瘤能力.方法:首先运用RT-PCR和Western blot方法检测MUC4在胰腺癌细胞系CAPAN-2和ASPC-1的表达情况.通过NetCTL 1.2、BIMAS、SYFPEITHI和IEDB软件预测打分来选取MUC4的HLA-A2限制性表位;替换MUC4抗原锚定位点氨基酸获得改造肽;候选表位肽的合成方法为标准的Fmoc化学合成法,结合力实验用于检测候选表位与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合能力,ELISPOT实验检测候选表位肽诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分泌IFN-γ的能力,体外细胞毒实验活性检测候选肽诱导CTL的能力.结果:MUC4在胰腺癌细胞系CAPAN-2和ASPC-1均有表达.P1944-1Y、P1944-2L、P1944-1Y2L、P2004和P2004-1Y9V具有较好的结合力,且P2004-1Y9V、P1944-1Y2L 等改造肽与HLA-A2的结合力高于原肽.ELISPOT实验结果显示表位肽 P1944、P1944-1Y2L、P2004和P2004-1Y9V诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力.P1944-1Y2L和P2004-1Y9V诱导特异性T细胞免疫分泌的IFN-γ略高于原肽.细胞毒实验结果显示表位P1944、P1944-1Y2L、P2004和P2004-1Y9V对CAPAN-2细胞均有一定的杀伤作用.P1944-1Y2L和P2004-1Y9V特异性CTLs对CAPAN-2细胞杀伤率高于原肽特异性CTLs.结论:MUC4抗原改造表位P1944-1Y2L、P2004-1Y9V与天然表位P1944、P2004相比有更高的HLA-A2分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且改造肽抗肿瘤免疫效应强于天然表位.P1944-1Y2L和P2004-1Y9V是优秀的MUC4抗原的HLA-A2限制性CTL候选表位,可以成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位.