基于CRISPR/Cas9技术的 MAVS和 NFκB1基因敲除MDCK细胞系的构建及初步鉴定

目的:构建线粒体抗病毒信号(mitochondrial antiviral signaling, MAVS)和核因子 κB1(nuclear factor kappa B1, NFκB1)基因敲除的犬肾细胞系(Madin-Daby canine kidney cells, MDCK)，对细胞系的生长特性、流感病毒(influenza virus, Flu)的增殖特性进行初步鉴定。 方法:采用CRISPR/Cas9技术，将MDCK细胞的 MAVS和 NFκB1基因敲除，获得稳定的敲除细胞系。接种Flu并检测培养上清中病毒的血凝(hemagglutinination, HA)滴度和TCID 50滴度，与野生MDCK细胞进行比较。 结果:获得2株稳定敲除的MDCK细胞系MDCK- MAVS－和MDCK- NFκB1 －，与野生MDCK细胞同样为贴壁的上皮样细胞。接种Flu后，2株敲除细胞系测定的病毒HA滴度与野生细胞相比无明显差异，TCID 50分别比野生MDCK细胞系提高了9.5倍和10倍，其差异有统计学意义( P＝0.0316)。 结论:本研究构建的2株基因敲除细胞系MDCK- MAVS－和MDCK- NFκB1 －能够提高Flu的感染力，为Flu的分离培养提供了新的候选细胞系。