Runx3敲减抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs向成骨分化

目的 研究Runx3敲减对BMP9诱导的小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs成骨分化的作用.方法 BMP9腺病毒感染iMEFs,用Western blot检测内源性Runx3蛋白的表达.Runx3 干扰腺病毒ad-siRunx3和BMP9条件培养基共同处理iMEFs,用碱性磷酸(ALP)染色和活性定量测定检测成骨早期指标ALP;用茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积;用RT-PCR检测成骨相关基因Id1、Id2、Id3和Runx2,用Western blot检测成骨相关蛋白Dlx5;用SBE荧光素酶报告质粒检测smad 1/5/8的转录活性.结果 BMP9可以使Runx3表达降低(P＜0.05);干扰Runx3可以抑制早期成骨指标ALP活性(P＜0.05)和晚期成骨指标钙盐沉积;ad-siRunx3抑制BMP9诱导的成骨相关转录因子Id1、Id2、Id3和Runx2基因的表达(P＜0.05)及DLX5蛋白的表达(P＜0.05).结论 敲减Runx3可以抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞向成骨分化.