比格犬雌激素受体ERβ以及剪切异构体ERβ419、ERβ431的转录活性分析

目的 分析比格犬雌激素受体ERβ以及剪切异构体ERβ419、ERβ431的转录活性.方法 将细胞分为6组,空白对照组(正常含有培养液的293T细胞),LV5-ERβ组(稳定表达ERβ的293T细胞),LV5-NC组(感染慢病毒LV5空载体的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ431组(稳定表达ERβ431的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ419组(稳定表达ERββ419的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ419-NC组(感染慢病毒Lenti-OE-Flag空载体的293T细胞).其中每组组内又分为2组,每组细胞瞬时转染构建的重组质粒ERE-LUC和RLUC,每组中的其中一组加入终浓度为10μmol/L的E2,而另一组内加入等量无水乙醇.分别检测每组加入刺激(E2和无水乙醇)前后的荧光素酶活性.结果 成功地将雌激素反应元件ERE克隆到荧光素酶报告载体pGL3-Vector启动子上;设计引物扩增出的hRluc-neo基因成功克隆到pGL3-Basic载体;加入雌激素后,比格犬ERβ转录活性明显升高(P＜0.01),而ERβ419和ERβ431转录活性在雌激素加入前后变化不大(P＞0.05).结论 成功建立了比格犬ERβ的转录激活系统,而ERβ419和ERβ431的LBD区域都有部分的缺失,使得其不能与雌激素结合,继而转录活性无法被激活.