一种高效制备人β2微球蛋白标准物质的方法和应用

目的 构建重组人 β2微球蛋白表达体系,高效快速获取 β2微球蛋白,为临床实验室检测参考物质的制备奠定基础.方法 优化人 β2微球蛋白序列,人工合成优化序列片段并与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至pRSF-Duet载体以构建重组人 β2微球蛋白表达质粒.使用大肠杆菌E.coli BL21(DE3)对重组质粒进行诱导表达,TEV蛋白酶切除MBP,全自动生化仪测定 β2微球蛋白浓度.对重组蛋白在4℃和 –20℃储存条件下的稳定性进行检测,对 β2微球蛋白纯品与校准品的互通性进行分析.结果 成功构建重组人 β2微球蛋白表达质粒,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)成功诱导重组蛋白表达,MBP-β2微球蛋白(MBP-β2-MG)浓度可达100 mg/L,β2微球蛋白浓度可达185 mg/L.在4℃和 –20℃储存条件下监测64周,β2微球蛋白稳定存在.β2微球蛋白纯品与RANDOX生化校准品互通性良好.结论 通过密码子优化,成功构建了重组 β2微球蛋白的高效表达系统,β2微球蛋白可溶性高,稳定性好,与国际通用校准品互通性好,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求.