依博素生物合成基因ste22的异源置换研究

目的依博素是由链霉菌产生的一种新型胞外多糖，具有显著抗类风湿性关节炎的作用，我们研究已确定了该多糖的生物合成基因簇（ste）。为了对依博素结构进行改造以提高其生物活性，对其生物合成基因 ste22进行了异源置换研究。
　　方法采用 PCR 扩增方法从乳酸菌获得了编码葡萄糖糖基转移酶的基因 gtf，通过基因同源重组双交换，从链霉菌中置换了 ste22基因。采用白细胞介素-1合成酶活性测定方法及小鼠巴豆油急性炎症模型，初步确定了基因置换株的依博素衍生物生物活性。
　　结果获得了葡萄糖糖基转移酶基因置换株 Streptomyces sp.139（gtf-22），产生了依博素新衍生物 EPS-22g。研究表明该衍生物与依博素相比，葡萄糖比例从2.14%显著上升到48.64%，体外活性实验显示，其对炎症细胞因子白细胞介素-1合成关键酶 ICE 抑制率高于依博素，小鼠巴豆油急性炎症体内活性分析结果证明，该衍生物抑制活性亦高于依博素。
　　结论采用异源基因置换生物合成基因的方法改造依博素产生菌，可能是获得生物活性较好新多糖衍生物的一种有效手段。