微RNA-19b-3p通过靶向原癌基因鼠双微体4影响胰腺癌的发展

目的:探讨微RNA（miR）-19b-3p对胰腺癌PANC-1细胞原癌基因鼠双微体4（MDM4）表达和细胞增殖、凋亡活性的影响。方法:采用脂质体转染法转染micrONrno-miR-19b-3p mimic（拟似组）、micrOFF mmu-miR-19b-3p inhibitor（阻遏组）和Lipofectamine 2000转染试剂（阴性组）至人胰腺癌PANC-1细胞，并以未特殊处理正常生长的PANC-1细胞作为空白组，采用荧光显微镜观察各组细胞转染是否成功，使用荧光实时定量PCR法检测微RNA-19b-3p转录水平以判断转染效率。转染24、48、72 h采用MTT法检测各组细胞增殖活性，采用荧光实时定量PCR法检测细胞内微RNA-19b-3p、MDM4含量，转染72 h采用Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后PANC-1细胞凋亡情况。转染72 h采用免疫印迹法检测各组PANC-1细胞MDM4蛋白表达水平。结果:转染后48 h 4组均有明显绿色荧光，微RNA-19b-3p转染PANC-1细胞转染效率为72.1%。转染24、48、72 h时拟似组PANC-1细胞增殖活性、微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平都高于空白组、阴性组和阻遏组（均 P<0.05），阻遏组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平低于空白组、阴性组和拟似组（均 P<0.05），空白组和阴性组细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平差异无统计学意义（均 P>0.05）。空白组、阴性组、拟似组和阻遏组4组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达均与时间呈现正相关（细胞增殖活性 r=0.629、0.582、0.524、0.472，微RNA-19b-3p mRNA表达水平 r=0.449、0.475、0.501、0.399，FL-MDM4表达水平 r=0.504、0.423、0.447、0.431，S-MDM4表达水平 r=0.472、0.428、0.414、0.408，均 P<0.05）。转染72 h时拟似组细胞凋亡水平低于空白组、阴性组、阻遏组[（2.02±0.48）%比（3.48±0.63）%、（3.52±0.52）%、（8.23±0.82）%，均 P<0.05]，阻遏组细胞凋亡水平高于空白组、阴性组和拟似组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。转染72 h拟似组MDM4蛋白表达水平高于空白组、阴性组和阻遏组[（1.162±0.114）比（0.749±0.126）、（0.663±0.137）、（0.347±0.092），均 P<0.05]，阻遏组MDM4蛋白表达水平低于空白组和阴性组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:微RNA-19b-3p可能通过影响MDM4表达，进而影响p53基因活性，促进胰腺癌的增殖，微RNA-19b-3p可能成为治疗胰腺癌新的靶点。