舒筋接骨汤调控微小RNA?30a?5p/Sprouty1基因对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响

目的 探讨舒筋接骨汤对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖和成骨分化能力的影响及其可能作用机制.方法 培养hMSCs,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度舒筋接骨汤生药和下调Sprouty1对细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR(qRT?PCR)检测hMSCs中微小RNA?30a?5p(miR?30a?5p)表达水平,RT?qPCR和免疫印迹法检测不同分组细胞中Sprouty1及核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)mRNA和蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR?30a?5p靶向调控Sprouty1的作用.结果 舒筋接骨汤呈浓度依赖性促进hMSCs增殖,1 mg/ml时促进细胞增殖效果最佳;与对照组比较,舒筋接骨汤处理可明显促进hMSCs中miR30a?5p及RUNX2、OSX mRNA和蛋白表达(P<0.05),抑制Sprouty1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果显示miR?30a?5p靶向负调控Sprouty1的表达;下调Sprouty1促进hMSCs增殖及细胞中OSX、RUNX2 mRNA和蛋白表达.结论 舒筋接骨汤可能通过调控miR?30a?5p/Sprouty1基因表达,促进hMSCs增殖和成骨分化.