改性甲壳素对体外培养人表皮细胞增殖的影响

目的 利用体外细胞培养技术,研究改性甲壳素对人表皮细胞增殖的影响.方法 人表皮细胞株(HaCaT)分别加入含0、10、100、500、1 000、2 000、5 000 mg/L改性甲壳素的培养液,培养1、2、4、8、14 d,观察和检测处理后的细胞,采用MTT法评价改性甲壳素对HaCaT增殖能力的影响,ELISA法检测细胞培养上清人Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量,RT?PCR、蛋白免疫印迹法检测细胞Ⅰ型胶原COⅡA1及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达情况.结果 相同作用时间下,10、100 mg/L浓度的改性甲壳素对HaCaT增殖无明显作用,500、1 000、2 000、5 000 mg/L浓度的改性甲壳素对细胞增殖有明显促进作用(均P<0.05),且随浓度的增加,相对增殖率升高,提示改性甲壳素浓度促进HaCaT增殖作用呈正相关(r=0.8551,P=0.03).含500、1 000、2 000、5 000 mg/L改性甲壳素培养液中培养2 d后细胞相对增殖率即开始升高(均P<0.05),随时间的推移,细胞相对增殖率也逐渐升高(均P<0.05).相同作用时间HaCaT细胞分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原量500 mg/L开始增加(均P<0.05),1 000 mg/L之后趋于稳定.在含500、1 000、2 000、5 000 mg/L改性甲壳素培养液中培养2 d后HaCaT细胞分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原量即开始升高(均P<0.05),随时间的推移,Ⅰ型和Ⅲ型胶原量也逐渐升高(均P<0.05).500 mg/L改性甲壳素能明显增加HaCaT细胞中Ⅰ型胶原COⅡA1和PCNA基因mRNA的表达(均P<0.05),并促进细胞合成分泌Ⅰ型胶原COⅡA1及PCNA蛋白(均P<0.05).结论 改性甲壳素可明显促进表皮细胞的增殖,促进Ⅰ型胶原和PCNA蛋白表达,有望在伤口愈合的治疗中发挥重要的平衡修复作用.