Poly（A）加尾实时荧光定量PCR检测血清微RNA-122的表达及其临床初步应用

目的：建立Poly（A）加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测血清微RNA?122（miR?122）水平，并初步探讨其临床应用价值。方法选取2013年9月至2014年9月本院就诊的糖尿病患者和健康体检者120例为研究对象，分为糖尿病脂质代谢紊乱组（n=40）、糖尿病非脂质代谢紊乱组（n=40）和对照组（n=40）。提取血清总RNA，miR?122 Poly（A）聚合酶加尾逆转录获得cDNA，进行SYBR Green I实时荧光定量PCR扩增。制作C.elegans?miR?39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线定量检测血清miR?122水平，进行3组血清miR?122水平的组间比较。结果该方法可定量检测血清miR?122水平，PCR扩增产物特异性好，熔解曲线呈单峰；检测灵敏度为102拷贝/μl，检测线性范围102~107拷贝/μl。高、中、低浓度样本重复性检测的批内变异系数（CV）分别为2.23%、2.48%和2.75%，其批间CV分别为5.35%、5.88%和5.72%，显示该方法具有较好的重复性和稳定性。该方法检测糖尿病脂质代谢紊乱组、糖尿病非脂质代谢紊乱组和对照组的血清miR?122水平分别为（4.85±3.68）×103拷贝/μl、（3.06±1.86）×103拷贝/μl和（1.03±0.82）×103拷贝/μl，糖尿病脂质代谢紊乱组血清miR?122水平高于糖尿病非脂质代谢紊乱组和对照组（均P<0.01），糖尿病非脂质代谢紊乱组血清miR?122水平高于对照组（P<0.05）。结论成功建立Poly（A）加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测血清miR?122水平，该方法的灵敏度高、特异性和重复性均较好。