人γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因的一个新转录调控区的实验研究

目的 研究人γ-GCS催化亚单位(GCLC)基因转录起始位点上游-810~-769 bp调控区的功能及转录调控元件.方法 克隆人GCLC基因调控区片段,构建野生型质粒.缺失突变-770~-766间的GATAAG核苷酸及定点突变-765,-764的GC为TA,-755,-754的GG为TA,构建突变型表达质粒.通过质粒转染表达方法研究转录调控功能,EMSA+super-shift方法鉴定GCLC基因转录起始位点上游-810~-769 bp的转录调控元件.结果 人GCLC基因始位点上游-810~-769 bp为正性调控区,这一区间有NF-κB、AP-2转录调控元件,转录因子AP-2能抑制转录因子NF-κB对人GCLC基因转录起始位点上游-790~-766 DNA序列的结合.结论 人GCLC基因转录调控区转录起始位点上游-810~-769 bp为新发现的正性调控区,其内存在NF-κB、AP-2调控元件.