一体化灌注法体外构建活化人工骨的优化研究

目的 探讨人胚成骨细胞在多孔β-磷酸三钙(β-TCP)支架内灌注性接种及培养的影响因素及其作用机制,对一体化灌注法体外构建活化人工骨进行优化研究.方法 应用自行设计的灌注式生物反应器进行多孔β-TCP支架内人胚成骨细胞的一体化灌注性接种和培养,以静态接种为对照.通过细胞活力(MTT法)测定、活细胞接种率、组织形态学观察和计量学分析等分别检测细胞接种时间、接种密度、灌注速率等因素对支架内细胞黏附和生长的作用.结果 细胞灌注接种效果优于静态接种;灌注接种-灌注培养法细胞生长及分布优于静态接种-灌注培养法.接种时间、接种密度、灌注速率等因素均显著影响细胞接种及培养效果.灌注法构建活化人工骨的最优条件:接种时间12h～24h,接种密度2×105/ml～5×105/ml,灌注接种速率1 ml/min,灌注培养速率0.5 ml/min～2ml/min(灌注初期24 h)及2 ml/min(灌注24 h后).结论 一体化灌注法利于多孔β-TCP支架内人胚成骨细胞的黏附和生长.接种时间、接种密度、灌注速率等因素均影响活化人工骨体外构建效果,对其进行优化有助于人工骨移植物的临床转化和推广应用.