rAd-DKK1-shRNA表达载体的构建

目的 筛选构建针对骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSC)的小干扰RNA(shRNA)腺病毒载体.方法 根据shRNA靶位点的选择原则,从TRCshRNA数据库及Ambion shRNA数据库中择优选取3条DKK1 shRNA序列,通过DKK1构建过表达载体,筛选出最佳干扰序列,体外同源重组构建DKK1-shRNA腺病毒表达载体,经酶切、PCR鉴定、测序.结果 成功构建pYr-1.1-DKK1-shRNA-153、pYr-1.1-DKK 1-shRNA-155、pYr-1.1-DKK1-shRNA-Am表达载体,分别通过RT-PCR与Western印迹检测DKK1的表达,结果显示pYr-1.1-DKK 1-shRNA-153为最佳干扰序列.结论 成功构建了针对BMSC的小干扰RNA(shRNA)腺病毒载体,为后续靶向目的基因的实验研究提供了依据.