慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白载体转染大鼠心肌成纤维细胞

目的 探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1 α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点.方法 差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定.不同滴度及条件的LV-SDF-1 α-GFP转染心肌成纤维细胞,观察荧光表达,探索最佳转染条件.LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及阴性对照CON145病毒的转染心肌成纤维细胞,绘制生长曲线,探索转染对心肌成纤维细胞的增殖有无明显影响.利用最佳转染剂量组转染心肌成纤维细胞,斑点印迹法(Dot blotting)检测SDF-1 α目的蛋白分泌.计量资料进行统计学分析.结果 心肌成纤维细胞具很高活性,传至4代纯度高,折光度好,无自发性搏动.LV-SDF-1 α-GFP最佳转染感染复数(MOI)值为10,添加感染增强液,聚凝胺组感染效果最好,效率达80％.LV-SDF-1 α-GFP组以及阴性对照CON145组对心肌成纤维细胞毒性作用小,细胞形态无明显变化,与非转染组生长曲线相似,差异无统计学意义(P＞0.05).转染LV-SDF-1 α-GFP的心肌成纤维细胞培养至第4天SDF-1α蛋白分泌量达最高值,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 LV-SDF-1 α-GFP载体对心肌成纤维细胞具很高的转染效率,细胞毒性小,并能够分泌SDF-1α目的蛋白.