6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3对人脐静脉内皮细胞管腔形成的影响

背景:糖尿病性视网膜病变中关于新生血管的研究多局限于血管内皮生长因子,而6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶(phosphofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase,PFKFB3)也有一定的作用.目的:探讨PFKFB3小干扰RNA(siRNA)对高糖环境下人脐静脉内皮细胞的作用及机制.方法:将人脐静脉内皮细胞分为4组:正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖)、正常糖+PFKFB3-siRNA组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、高糖+PFKFB3-siRNA组.正常糖+PFKFB3-siRNA组和高糖+PFKFB3-siRNA组以PFKFB3-siRNA转染人脐静脉内皮细胞.采用Western blot检测PFKFB3的沉默表达效果,并选取沉默效果最佳者进行后续实验.体外管腔形成实验检测细胞成管能力,实时荧光定量PCR检测PFKFB3的mRNA表达,Western blot检测PFKFB3及磷酸化AKT/AKT的蛋白表达.结果 与结论:①PFKFB3-siRNA能明显抑制PFKFB3的蛋白表达(P＜0.01);②与正常糖组相比,正常糖+PFKFB3-siRNA组管腔形成总长度增加(P＜0.05),高糖组管腔形成总长度明显减少(P＜0.01),高糖+PFKFB3-siRNA组管腔形成总长度无明显变化(P＞0.05);与高糖组相比,高糖+PFKFB3-siRNA组管腔形成能力明显增加(P＜0.05);与正常糖组相比,高糖组中PFKFB3的mRNA及蛋白表达均明显升高(均P＜0.01);与高糖组相比,高糖+PFKFB3-siRNA组的PFKFB3蛋白表达降低(P＜0.05);③与正常糖组相比,正常糖+PFKFB3-siRNA组与高糖组中磷酸化AKT/AKT比值均降低(P＜0.01),而高糖组+PFKFB3-siRNA组磷酸化AKT/AKT蛋白比值无明显变化(P＞0.05);与高糖组相比,高糖+PFKFB3-siRNA组磷酸化AKT/AKT蛋白比值升高(P＜0.01).提示采用siRNA沉默PFKFB3基因表达可抑制人脐静脉内皮细胞中PFKFB3的表达,促进管腔形成能力,其机制可能与下调AKT表达有关.