骨硬化蛋白单链抗体对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响

背景:拮抗骨硬化蛋白可影响Wnt/β-catenin信号通路,刺激成骨活动,增加骨合成代谢.目的:观察骨硬化蛋白单链抗体对小鼠骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响.方法:全骨髓贴壁法分离得到C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,成骨诱导14 d后茜素红染色,成脂诱导7 d后油红O染色,检测骨髓间充质干细胞的分化能力;取第3代骨髓间充质干细胞,实验组用含50 μg/L骨硬化蛋白单链抗体(Scl-scFv)的α-MEM完全培养基培养,对照组用等量α-MEM完全培养基培养,MTT法检测细胞的增殖能力;第7天Real-Time PCR检测Col1、ALP、RUNX2、OPN、OCN 的mRNA表达,同时进行碱性磷酸酶染色;第4,7,10天Western blot检测Col1和OPN蛋白表达,ELISA检测细胞培养上清中骨钙素水平.结果与结论:①骨髓间充质干细胞成骨诱导后茜素红染色可见明显钙结节,成脂诱导后油红O染色可见橘红色油滴;②随着培养时间的延长,实验组的吸光度值与对照组比较差异无显著性意义;③实验组Col1、ALP、RUNX2、OPN、OCN的mRNA表达均高于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05),碱性磷酸酶染色强于对照组;④实验组Col1、OPN蛋白水平高于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05);⑤结果表明,骨硬化蛋白单链抗体对骨髓间充质干细胞增殖无明显作用,可以促进其向成骨分化.