高效Pdx1/insulin双报告基因载体的构建及其初步应用

背景:胰岛细胞移植是治疗1型糖尿病最有效的方法之一,然而移植细胞来源短缺限制了其临床应用.多能干细胞有望成为胰岛细胞移植的理想种子细胞,但其向胰岛β细胞分化是一个复杂的过程.目的:构建高效Pdx1/insulin双报告基因载体,探讨其实时监测诱导多能干细胞向胰岛β细胞分化中关键性基因表达的可行性.方法:首先在pTiger载体上引入嘌呤霉素抗性,然后以646 bp的小鼠Ins1启动子替换了原来载体上410 bp的小鼠Ins1启动子,获得高效Pdx1/insulin双报告基因载体.最后,将载体导入INS-1细胞和诱导多能干细胞,验证其功能.结果与结论:①实验成功构建了高效Pdx1/insulin双报告基因载体;②在INS-1细胞中验证了载体获得嘌呤霉素抗性,提高了insulin表达效率,并在INS-1细胞中检测到Pdx1和insulin的表达;③实验初步证明了Pdx1/insulin双报告基因能够有效监测细胞分化过程中Pdx1和insulin基因的表达.