胰酶联合Ⅱ型胶原酶分离培养髓核细胞：培养基中葡萄糖浓度的选择

背景：椎间盘退变是脊柱退行性疾病的发病基础，研究椎间盘的退变因素，对脊柱退行性的疾病的预防和治疗有重要意义。
　　目的：采用胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化法体外分离培养兔髓核细胞，并观察髓核细胞在不同葡萄糖浓度培养基中的生长及增殖状况，确立最适宜髓核细胞生长的葡萄糖浓度。
　　方法：胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养兔髓核细胞，倒置显微镜观察细胞形态并计数细胞数量，绘制细胞生长曲线。苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色观察细胞形态。细胞免疫组织化学染色结合免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原蛋白表达情况。分别使用0，6.25，12.5，17.5，25 mmol/L葡萄糖培养基培养髓核细胞24 h后，检测各组髓核细胞增殖及凋亡情况。
　　结果与结论：①髓核细胞形态：兔髓核细胞染色后镜下观察呈多角形、短梭形，有一两个核仁，随着传代次数增加，细胞伸出伪足，胞体逐渐变细长；②基因表达：体外分离培养髓核细胞的Ⅱ型胶原蛋白及聚集蛋白多糖基因均可稳定表达；③细胞增殖：各组中细胞增殖比率以葡萄糖17.5 mmol/L组最高，显著高于葡萄糖0，25 mmol/L组(P<0.05或P<0.01)；④细胞凋亡：葡萄糖0 mmol/L组细胞凋亡率最高(P<0.05)，其他各组差异无显著性意义(P>0.05)。④结果证实：胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化法可收获较多的原代髓核细胞，葡萄糖浓度17.5 mmol/L比较适宜髓核细胞体外培养。