人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建

背景：多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量，进而影响多巴胺能神经递质的作用，导致相关疾病的发生。
　　目的：通过克隆人DRD1基因的启动子区，构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性，为研究DRD1基因的转录调控提供基础工具。
　　方法：以人静脉血基因组DNA为模板，通过PCR扩增DRD1基因启动子序列并克隆至pGM-T载体，测序验证无误后酶切连接至萤火虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic，构建含有DRD1基因启动子的荧光素酶报告基因载体，采用阳离子脂质体法与内对照质粒pGL3-TK共转染HEK293细胞同时以不含启动子的pGL3-Basic载体与内对照质粒pGL3-TK共转染作为阴性对照组，化学发光仪检测相对荧光强度。
　　结果与结论：①通过酶切和测序验证重组荧光素酶报告基因载体的DRD1基因启动子区序列正确；②与阴性对照组相比，该重组载体转染HEK293细胞后具有转录活性；③成功构建了含有DRD1基因启动子区的荧光素酶报告基因载体，为研究该基因的转录调控提供了基础工具。