人脂肪干细胞的分离培养与生物学特性★

背景:高效、稳定地获得大量较高纯度的人脂肪干细胞,是其在组织工程学及再生医学中广泛应用的基础和前提. 目的:探索体外培养脂肪干细胞的适宜条件,从而提高其增殖能力. 方法:采用胶原酶消化的方法,从人腹部皮下块状脂肪中分离出脂肪干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞、低糖培养基体外培养扩增.Giesam 染色后观察细胞形态;绘制细胞生长曲线并进行细胞周期分析,观察分析传代后染色体核型改变;选取第3代脂肪干细胞做流式细胞鉴定、EdU 细胞增殖能力检测以及克隆形成实验. 结果与结论:分离培养的原代脂肪干细胞形态不一,经传代后的细胞形态趋于长梭形,排列紧密呈漩涡状生长.细胞生长曲线呈 S 形,细胞周期分析及 EdU 掺入法结果显示体外培养的脂肪干细胞具有较强的增殖能力.经染色体核型分析结果提示,体外培养不会引起脂肪干细胞的核型改变.第3代脂肪干细胞经流式细胞仪检测 CD29,CD44,CD90, CD105均呈阳性表达,而 CD34和 CD45呈阴性;克隆形成率为8.8%;在一定的诱导条件下,脂肪干细胞能够向脂肪细胞及成骨细胞分化.结果说明采用胶原酶消化法可成功分离培养人脂肪干细胞,且具有较强的增殖能力.