小鼠Derlin-1重组腺病毒的构建及在胰岛中的表达鉴定

目的 构建小鼠Derlin-1重组腺病毒载体,包装、纯化并检测病毒滴度,观察重组腺病毒在小鼠胰岛中的表达.方法 设计合成针对小鼠Derlin-1基因cds区的引物序列,采用PCR的方法以小鼠胰岛cDNA为模板,扩增目的基因Derlin-1,经Xba Ⅰ和HindⅢ双酶切后,克隆至AdTrack-CMV穿梭质粒上,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,通过脂质体将正确的重组体包裹并转染293A细胞,在其中包装扩增病毒.利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP,对病毒滴度和感染效率进行检测.最终得到pAd-Derlin-1重组腺病毒载体,体外转染小鼠胰岛,使用Western印迹法检测Derlin-1蛋白表达水平.结果 酶切鉴定证明Derlin-1基因重组腺病毒构建成功,病毒有较强感染能力.并验证其在小鼠胰岛中成功过表达.结论 应用同源重组方法成功构建了含小鼠Derlin-1基因的重组腺病毒.为进一步研究Derlin-1在胰岛β细胞中的作用奠定了基础.