甘氨酸对缺氧肾细胞保护作用的分子靶点研究

目的 明确甘氨酸对缺氧肾细胞保护作用的分子靶点.方法 分别定点突变甘氨酸受体 (glycine receptor α1, GlyR α1)配基结合位点202位酪氨酸 (Thr)为苯丙氨酸 (Phe) 和亮氨酸 (Leu),野生型及突变型GlyR α1转染入人胚胎肾细胞 (HEK293细胞) 细胞,观察GlyR α1突变是否影响甘氨酸和士的宁对缺氧肾细胞的保护作用;RT-PCR扩增犬肾细胞(MDCK细胞)内人源性GlyR α1的同源基因,设计4对短链寡核苷酸 (siRNA),观察RNAi抑制内源性GlyR α1表达对甘氨酸细胞保护作用的影响.结果 细胞ATP耗竭3 h后,甘氨酸处理组中,转染了正常GlyR α1、苯丙氨酸突变的GlyR α1及亮氨酸突变的GlyR α1的HEK293细胞的LDH释放率分别为(41.17±2.61)%、(62.67±4.53)%及(41.33±6.02)%.士的宁处理组中,分别有(44.50±5.97)%、(45.33±6.60)%及(59.17±6.97)%的LDH自上述3种转染细胞中释放到培养介质.4对siRNA对靶基因表达的抑制不完全相同,最强抑制作用达70 %以上,细胞LDH释放率随GlyR α1表达水平下降而升高.结论 GlyRα1配基结合位点的不同突变,影响了不同配基的保护作用.抑制内源性GlyR的表达减弱了甘氨酸对ATP耗竭细胞的保护作用.甘氨酸发挥细胞保护作用时,其靶分子为GlyR.