人卵巢颗粒细胞分离培养的优化及生物学特性

目的:建立原代人卵巢颗粒细胞(hGCs)的分离培养方法,观察其生物学特性.方法:取卵日,收集hGCs,分为对照组(DMEM培养基)和实验组(DMEM培养基:卵泡液=1:1)进行培养.比较2组hGCs的生长状态和雌激素分泌情况.利用RT-qPCR检测Nanog、Oct4、Sox2的表达,应用流式细胞术检测CD44、CD73、CD45的表达.结果:hGCs培养24 h贴壁良好,细胞间伸出伪足.对照组和实验组分别在培养14d和21d后出现凋亡.实验组雌激素的分泌显著增加,第9天出现高峰,第21天显著下降.培养第7天实验组Oct4和Nanog mRNA表达显著增加.培养7d后,CD44、CD73表达阳性,CD45表达阴性.结论:该方法简单、有效,可获得大量hGCs.培养基中添加卵泡液有益于hGCs的生长,增加培养天数.同时hGCs可分泌雌激素并具有一定的干细胞特性.