大鼠尿素转运蛋白B基因克隆及真核表达载体的构建

目的 克隆SD大鼠尿素转运蛋白B(urea transporter B,UT-B)的CDS全长基因并构建其真核表达载体.方法 从SD大鼠肾髓质中提取总RNA并经逆转录反应获取总cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增UT-B基因的CDS区全长片段,PCR产物加"A"尾后克隆至pMD-18T克隆载体,双酶切后获取UT-B片段,T4 DNA连接酶将UT-B片段与Kpn I和Bam HI双酶切后的真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,构建大鼠UT-B真核表达载体pcDNA3.1(-)-UT-B.结果 成功克隆了SD大鼠UT-B基因,构建的pcDNA3.1(-)-UT-B载体经PCR扩增、Kpn I和Bam HI双酶切鉴定及测序验证,表达载体包含UT-B基因,且UT-B碱基序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列一致.结论 成功克隆了该基因并构建了其真核表达载体pcDNA3.1(-)-UT-B,为进一步进行UT-B基因转染治疗尿毒症的研究奠定了基础.