利用CRISPR/Cas9技术构建环指蛋白126基因敲除小鼠

目的 利用CRISPR/Cas9技术,获得环指蛋白126(RNF126)基因敲除小鼠模型.方法 针对C57BL/6小鼠Rnf126基因的第四外显子设计敲除引物,构建sgRNA重组表达载体.通过体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA,并以显微注射的方式将RNA导入到C57BL/6小鼠的受精卵中,通过胚胎移植至代孕母鼠.获得子代工程鼠后,用PCR对其进行鉴定.结果 成功获得针对鼠Rnf126基因的sgRNA以及Cas9 mRNA;通过显微注射获得了82枚状态良好的受精卵并成功移植至3只代孕母鼠体内;获得了11只F0代仔鼠,鉴定后选择一只单链缺失62个碱基的阳性鼠进行扩繁并在F1、F2代检测到该突变.结论 成功构建Rnf126基因敲除C57BL/6小鼠,该模型可用于RNF126基因及其表达产物的生物学功能研究.