C57BL/6J背景基因修饰小鼠精子冷冻保种及品系恢复方法

目的 建立一种高效的C57BL/6J背景基因修饰小鼠的精子冷冻及体外受精(IVF)方法.方法 以C57BL/6J小鼠为研究对象,围绕冷冻保护液、冷冻精子浓度、复苏后精子处理方法及IVF培养液等方面进行研究,IVF后2-细胞发育率作为冷冻和复苏效率评价标准,对比各组之间发育情况.结果 以R18S3(含质量比为18％棉子糖和3％脱脂奶粉)、M-R18S3冷冻保护液[含终浓度为477 μmol/L硫代甘油(MTG)的R18S3冷冻液]进行精子冷冻,复苏后在HTF培养液中进行IVF,2-细胞发育率分别为8.4％和20.6％;以R18S3和M-R18S3作为冷冻保护液,以含浓度为1 mmol/L还原性谷胱甘肽(GSH)的HTF培养液进行IVF,2-细胞发育率分别为25.0％和43.5％.高浓度精子冷冻及复苏法可获得64.2％的2-细胞发育率;选取4种C57BL/6J背景基因修饰小鼠进行精子冷冻及IVF,2-细胞发育率34％～90％,胚胎移植后出生率40％～57％.结论 M-R18S3作为冷冻保护液,采用高浓度精子冷冻法进行精子冷冻,冷冻精子复苏后进行受精滴洗涤筛选,以含1 mmol/LGSH的HTF培养液进行冷冻精子IVF,此技术体系可以作为C57BL/6J背景基因修饰鼠的保种及品系恢复手段.