精子膜处理方法对精子介导的外源质粒转基因效率的影响

目的 探讨超声、NaOH和溶血卵磷脂三种小鼠精子膜处理方法对转染质粒与精子共孵育后卵胞质内单精子注射(ICSI)授精,观察质粒转染的效率.方法 采用上述三种方法对小鼠精子进行膜处理,通过Transgreen/PI荧光染色,观察小鼠精子质膜的完整性；通过流式细胞仪检测小鼠精子DNA的完整性；将处理后的小鼠精子与带GFP的转染质粒共孵育,再采用ICSI与促排卵后成熟小鼠卵子授精,统计各组受精率、卵裂率及荧光囊胚率,观察三种方法对小鼠精子作为质粒载体ICSI后转基因效率的影响.结果 溶血卵磷脂方法处理小鼠精子膜的效果显著优于超声和NaOH组(99.2％ vs 94.7％％,90.9)(P＜0.05).三种方法对小鼠精子DNA结构的损伤无显著性差异(P＞0.05),行ICSI后三组小鼠胚胎发育率差异不显著(P＞0.05),各组之间荧光胚胎的形成率无显著性差异(P＞0.05).结论 三种小鼠精子膜处理方法的效率均能达到90％以上,且对小鼠精子DNA的损伤、行ICSI后小鼠胚胎的发育率和转基因效率无显著差异,因此,三种方法均可用于ICSI法小鼠转基因研究.