小鼠xist探针载体的构建及鉴定
Progress of Anatomical Sciences（2015）
摘要
目的 构建xist探针载体并检验其合成出的探针效果.方法B6D2F1 BAC(R3026)经PCR扩增获得xist基因,与双酶切的pSPT19质粒连接,经转化及测序鉴定pSPT19-xist载体构建成功.将构建好的pSPT19-xist载体线性化,并体外转录为RNA探针,应用荧光原位杂交检测雌性B6D2F1小鼠成纤维细胞内的xist表达.结果 经琼脂糖凝胶电泳,获得目的基因xist条带.基因测序证实所检测重组质粒序列与xist基因序列完全一致.体外雌性小鼠成纤维细胞检测到xist阳性表达.结论 成功构建xist基因pSPT19-xist重组质粒和RNA探针,并在成纤维细胞阳性表达.
更多关键词
B6D2F1mice,vector construction,RNA probe,fibroblast
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