络石内生菌露湿漆斑菌发酵液的细胞毒活性成分研究

目的 研究络石内生菌露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)发酵液的细胞毒活性成分,以期获得结构新颖、活性显著的化合物,为发现抗肿瘤先导化合物提供实验依据.方法 以氢谱(1 H-NMR谱)和薄层色谱(TLC)示踪,采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和高效液相色谱法(HPLC)进行发酵液浸膏的分离纯化;利用高分辨质谱、核磁共振谱及文献比对方法鉴定化合物的结构;采用MTT法测定化合物对HepG2细胞和Hela细胞的体外细胞毒活性,顺铂为阳性对照药;采用流式细胞术分析化合物对肿瘤细胞的细胞周期影响;采用Western blot法检测化合物处理后肿瘤细胞中细胞周期负调控蛋白p27的表达水平.结果 从M.roridum发酵液中分离获得2个单端孢霉烯化合物12'-hydroxyroridin E(1)和trichoverritone(2),其对HepG2细胞和Hela细胞有明显的增殖抑制作用,IC50值分别为0.78和1.86 μg/mL、0.05和0.13 μg/mL,阳性对照药顺铂的IC50值分别为4.9和2.28 μg/mL.进一步研究发现,12'-hydroxyroridin E(1)能诱导HepG2细胞G2期周期阻滞,且上调细胞中p27蛋白的表达.结论 12'-hydroxyroridin E(1)可能通过诱导HepG2细胞G2期周期阻滞而抑制其增殖抑制,该诱导作用可能与细胞中p27蛋白的表达上调相关.